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痢菌净中毒时鸡体内免疫器官中MDA、SOD、T-AOC的变化

信息来源:本站  浏览次数:587  发布时间:2016-03-16
 

[前言]痢菌净学名乙酰甲喹,是我国研制的具有自主知识产权的兽用抗菌药品,能抑制菌体的脱氧核糖核酸合成.本品抗菌谱广,对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均有较强的抑菌作用.不易产生抗药性,价格低廉,在畜牧养殖业上应用广泛。但在使用过程中常因超剂量应用导致中毒现象发生,造成不应有的损失。到目前为止,痢菌净损伤机体软组织的机理尚未阐明。自由基医学的发展为此方面的研究提供了新思路。本实验通过复制不同水平的鸡痢菌净中毒模型,检测机体的SOD、MDA、T-AOC,以期从痢菌净影响机体自由基代谢和抗氧化系统功能角度阐述痢菌净的中毒机理。

1材料与方法

1.1实验动物分组与处理

选用40日龄健康雄性海兰蛋鸡,严格按常规饲养标准饲养。将实验鸡随机分成3组,每组15羽。饲喂相同全价饲料。第Ⅰ组:正常对照组,饲喂正常的饲料拌料;第Ⅱ组:低剂量组,饲喂拌有400mg/kg的痢菌净饲料,3次/d;第Ⅲ组:高剂量组,饲喂拌有600mg/kg的痢菌净饲料,3次/d.饲喂3天.

1.2样本的采集和检测项目与方法

观察临床表现及剖检变化。饲养至第3天时先心脏采血,析出血清.再采取胸腺、脾、法氏囊免疫组织备用。检测项目方法:血清、胸腺、脾、法氏囊SOD、MDA、T-AOC、匀浆蛋白含量,分光光度计法。

1.3主要试剂与仪器

   主要试剂:SOD测定试剂盒,MDA测定试剂盒,T-AOC测定试剂盒,由南京建成生物工程所提供。主要仪器:731型分光光度计,

2实验结果

2.1临床表现及剖检变化

临床表现:高剂两组和低剂量组鸡表现精神沉郁,羽毛松乱,采食和饮水减少或废绝,头部皮肤呈暗紫色,排淡黄、灰白水样稀粪。2日龄时部分鸡出现瘫痪,两翅下垂,逐渐发展成头颈部后仰,弯曲,角弓反张、抽搐倒地而死。

剖检变化:死亡后的雏鸡脱水,肌肉呈暗紫色,腺胃肿胀,乳头暗红出血,肌胃皮质层脱落出血、溃疡。肝脏肿大,呈暗红色,质脆易碎。肾脏出血,心脏松弛,心内膜及心肌有散在性出血点。肠道黏膜弥漫性充血,肠腔空虚,小肠前部有黏稠淡灰色稀薄内空物,泄殖腔严重充血。

2.2SOD的检测结果

由表1可知:各痢菌净中毒组血清、胸腺、脾、法氏囊SOD均在不同程度地高于对照组。

                           表1SOD的检测结果             单位:(μ/ml)                               

组别

胸腺

     脾

法氏囊

血清

第Ⅰ组

6.264±0.146A

4.513±0.104A

9.426±0.104A

160.80±8.472A 

第Ⅱ组

4.106±0.207B

3.298±0.103B

7.236±0.246C

118.322±9.407C

第Ⅲ组

3.041±0.107B

2.143±0.079B

5.694±0.278B

99.687±6.737B

   注:同一列数值角码字母相同者,表示两组间差异不显著。不同者,表示两组间差异显著,其中大写字母表示差异极显著(p<0.01),小写字母表示差异显著(p<0.05)

2.3 MDA的检测结果

由表2可知:各痢菌净中毒组血清、胸腺、脾、法氏囊MDA均在不同程度地高于对照组,但在脾的低剂量组中与对照组无显著差异。

表2MDA的检测结果             单位:(nmol/ml)

组别

胸腺

法氏囊

血清

第Ⅰ组

22.312±1.876A

5.843±0.795A

25.025±2.746A

4.262±0.193A

第Ⅱ组

28.047±2.763B

6.371±0.237A

28.340±3.214B

7.426±0.158C

第Ⅲ组

31.047±2.763B

9.019±0.421B

32.146±3.671B

6.170±0.226B


2.4 T-AOC的检测结果

由表3可知:各痢菌净中毒组血清、胸腺、脾、法氏囊T-AOC均在不同程度地高于对照组,在胸腺中毒组中第Ⅱ组与第Ⅰ组有显著差异(P<0.05),第Ⅲ组与第Ⅰ组差异极显著(P<0.01)。

                            表3 T-AOC的检测结果          单位:(μ/ml)     

组别

胸腺

法氏囊

血清

第Ⅰ组

12.421±1.462ACa

24.218±1.804A

24.152±2.318A

18.234±1.901A

第Ⅱ组

9.264±0.371ACc

19.240±1.041B

19.567±0.847B

13.265±0.437B

第Ⅲ组

7.689±0.244Bb

17.645±1.316B

19.131±0.367B

11.014±2.112B

3讨论

  超氧化物歧化酶(SOD)对机体的氧化与抗氧化平衡起着极其重要的作用,此酶能特异性地催化超氧阴离子自由基的歧化反应。在正常生理条件卜,机体内自由基不断生成,又不断被清除,生成与清除维持相对的动态平衡,因而从整体上看显示不出自山基对机体的氧化损伤或生理破坏作用。但是在杀菌药物中毒下,譬如痢菌净中毒,当机体内存在过量的药物时,药物中的有害物质可迅速转化为活性极强的自山基,使体内自山基增多。过多的自山基超出机体的清除能力,破坏了体内自由基产生与清除之间和动态平衡,从而发生山过多自由基引起的一系列对机体有害的生理、病理改变。其中,脂质的作用,主要是与质膜中的多不饱和脂肪酸反应,造成脂质过氧化,其分解产物MDA可造成DNA分子链断裂或碱基缺失,除形成致突变或致癌的病理学基础外,也可自行破坏各种生物膜结构的完整性,从而给机体细胞带来严重的损害。胸腺和脾脏作为机体的主要免疫器官,在免疫系统功能的正常发挥起着十分重要的作用,当任何因素使胸腺和脾脏受到损害时都会使细胞免疫和体液免疫的功能受到影响。而细胞免疫和体液免疫在全身防御、清除废物以及防治肿瘤癌症的发生中起着至关重要的作用。

T- AOC是近几年研究发现的用于衡量机体抗氧化系统功能状况的综合性指标。T- AOC的大小可代表和反映机体抗氧化酶系统和非酶系统对外来刺激的代偿能力以及机体自由基代谢的状态,其中的酶系统主要包括谷胱甘肽过氧化物酶(GSH- Px)、超氧化物歧化酶( SOD)、过氧化氢酶( CAT)等,非酶系统主要包括还原型谷胱甘肽( GSH) .VE .VC .VK .VA等维生素类、尿酸、血浆铜蓝蛋自(CP) .胡萝卜素、葡萄糖等,由于T-AOC具有很强的代表性,所以是机体反映机体抗氧化功能的一个良好指标。

痢菌净中毒时机体抗氧化能力降低,必然造成自由基和脂质过氧化物的蓄积,对机体造成一系列的损伤。如,破坏核酸和染色质:损害蛋白质和酶,脂质过氧化自山基从蛋白质分子中夺取氢原子,形成蛋白质自由基,进一步引起蛋白质聚合肽链断裂,亦可使蛋白质与脂质结合形成聚合物,致蛋白质变性、酶活性丧失:破坏脂类代谢,自由基反应可引发脂质过氧化的链式自由基反应:损伤生物膜,自由基和活性氧首先攻击生物膜的不饱和脂肪酸,使膜的流动性下降,膜蛋白聚合使生物膜的完整性遭到破坏。严重者,溶酶体膜破坏,溶酶体释放,细胞溶解破坏死亡;诱导多种疾病的发生:迄今发现,氧中毒、炎症、免疫失调、衰老、中毒病、心血、管系统疾病、肺病、肝病、胃肠道疾病、泌尿系统疾病、肌肉萎缩等均与自由基代谢异常有关。

本实验结果表明,中毒后在胸腺、脾、法氏囊内的SOD值减少,MDA值增加,T-AOC值减少,表明在胸腺、脾、法氏囊内清除MDA的能力减弱,痢菌净在胸腺、脾、法氏囊内通过某些反应产生了自由基,影响了自由基的代谢,从而使自由基增多。机体免疫组织内,含有大量的自由基,生物膜被大量的自由基破坏,使免疫组织丧失了免疫功能,无法产生可以清除自由基的SOD,引起免疫失调。自由基使机体更容易老化,各个组织功能减弱。